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細胞培養(yǎng)知識|細胞換液幾種方式
2023.09.04   點擊14673次

培養(yǎng)細胞的過程中,換液是一項常規(guī)的操作,通過換液清除掉細胞在生長過程中產(chǎn)生的代謝廢物,補充新鮮的含血清培養(yǎng)基,使細胞能夠正常生長。

換液前工作準備

環(huán)境準備:相對密封、防塵、防菌的無菌室

操作者準備:雙手清潔呈可操作狀態(tài)

物品準備:超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、廢液缸。

工作準備:預(yù)熱完全培養(yǎng)基,酒精棉擦拭培養(yǎng)基瓶外表面后移入生物安全柜或超凈工作臺。

細胞培養(yǎng)箱中取出的細胞,酒精棉擦拭培養(yǎng)瓶或皿外表面,移入生物安全柜或超凈工作臺。待生物安全柜中的循環(huán)風將試劑瓶和培養(yǎng)瓶的外表面吹拂幾分鐘后,擰開培養(yǎng)基瓶蓋虛掩,擰開培養(yǎng)瓶瓶蓋虛掩,培養(yǎng)皿蓋不用擰。

方式一、細胞全換液

如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基。

具體步驟:

1、將器材放入超凈臺,打開紫外照射滅菌,若是培養(yǎng)的細胞對溫度比較敏感,可以將含血清的培養(yǎng)基瓶放入37℃的水浴箱使得培養(yǎng)基溫度在37℃,再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌。另外,細胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時左右。

2、從培養(yǎng)箱取出細胞培養(yǎng)瓶,用酒精噴壺在瓶子表面噴灑75%酒精消毒,轉(zhuǎn)移到超凈臺,打開蓋子,輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,可用移液器加入新鮮含血清培養(yǎng)基,注意一定不要從細胞貼壁面加入培養(yǎng)基,應(yīng)從側(cè)壁加,動作輕柔,以免沖落細胞。

3、加好培養(yǎng)基后,蓋上蓋子,在瓶子上做標記,注明換液時間,細胞種類,操作人員等信息。

4、放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴瓶子表面,然后應(yīng)記得整理操作臺,用酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。

方式二、細胞半換液

如果是懸浮細胞,可以用半量換液法。細胞半換液又稱細胞半量換液,即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去,但該方法會損失一定量的細胞。

半換液原因:

1、給細胞提供適應(yīng)的緩沖環(huán)境;

2、細胞生長過程中可能會分泌某些生長因子,促進生長;

3、節(jié)省材料

4、方便操作:比如96孔板,換液很麻煩。所以常采用排槍進行半換液;

5、對于懸浮細胞的培養(yǎng),有時也會選用半換液減低細胞密度;

操作步驟:

1、吸去一半舊培養(yǎng)基

2、補充新鮮完全培養(yǎng)基。

懸浮細胞如果不想損失細胞,那就需要將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到離心管中,離心去除舊培養(yǎng)基,再用新培養(yǎng)基重懸細胞沉淀。

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