(本中文說明書為翻譯稿，僅供參考，應以英文版為準)

貨號：3091315 (Sigma-Aldrich : GAHK20)

儲存溫度：2-8℃

產品描述：

作為分析工具的酶已在食品，生化和制藥行業中得到廣泛使用。酶法具有特異性高，可重現性好，靈敏度高，反應快速的特點，因此是分析的理想選擇。由于酶的高度特異性和敏感性，因此可以在幾乎沒有樣品制備或沒有樣品制備的情況下，對粗物質進行定量測定食品和其他材料中的葡萄糖。

葡萄糖(HK)檢測試劑盒用于食品和其他材料中葡萄糖的定量、酶法測定。該試劑盒已應用于不同的系統以進行與下列課題有關的研究：

·HEK細胞中的肝葡萄糖和脂質平衡⁴

·產婦肥胖模型⁵

·纖維素酶燃料電池轉化⁶

原理：

在己糖激酶催化的反應中，葡萄糖被三磷酸腺苷(ATP)磷酸化。然后，在氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在下，在6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)催化的反應中，將6-磷酸葡萄糖(G6P)氧化為6-磷酸葡萄糖酸。在該氧化過程中，等分子量的NAD被還原為NADH。因此在340nm處吸光度的增加與葡萄糖濃度成正比。

注意事項和免責聲明：

本試劑僅供科研使用，不能用于藥品、家庭以及其他用途。有關危險和安全操作規程的信息，請參閱安全數據表。

試劑盒組成：

1、葡萄糖(HK)檢測酶試劑

• 用20ml水溶解小瓶內粉劑。

• 加水后，立即蓋緊瓶塞，并反轉混勻數次。

• 不可震動。

• 加20ml水溶解后，每瓶溶液含有1.5 mM NAD，1.0 mM ATP，1.0 U/ml G6PDH；并含有防腐劑苯甲酸鈉和山梨酸鉀。

小瓶粉劑保存于2-8℃。出現以下情況應丟棄試劑：

• 小瓶粉劑受潮結塊。

• 加水后不能充分溶解。

• 水溶液出現渾濁。

在沒有可見的微生物生長的情況下，試劑水溶液比較穩定。在18–26℃下保存7天，在2–8℃下至少保存4周。以水作為空白參照，如果新配制的溶液在340nm處的吸光度大于0.350，則該試劑溶液不適合使用。

2、葡萄糖標準溶液

• D-葡萄糖，1.0 mg/mL溶于0.1%的苯甲酸。

• 即用型標準溶液，符合NIST(美國國家標準技術研究所標準)標準。

• 在2-8℃穩定至少六個月。

• 如果出現混濁，請丟棄。

儀器：

1、分光光度計：可在340nm下測定吸光度。

2、量杯。

3、移液器：能夠準確分配10 μL至1.0 mL的體積。

操作步驟：

樣品制備：

液體：

• 用去離子水將樣品稀釋至葡萄糖濃度為0.05-5mg/mL。

• 如有必要，對溶液進行過濾或去蛋白處理以使其澄清。

• 樣品葡萄糖含量較低且顏色較深時，應予以脫色處理。

• 含碳酸或發酵樣品，須脫氣處理。

固體：

• 稱量0.1mg樣品。

• 用去離子水提取樣品�？梢詫⑷芤杭訜�(<75℃)以幫助萃取。

• 用去離子水稀釋提取液品至葡萄糖濃度為0.05-5mg/mL。

• 如有必要，對溶液進行過濾或去蛋白處理以使其澄清。

測定

• 吸取相當于0.5-50μg葡萄糖的溶液。

• 為使ΔA340在0.03-1.6之間，必要時可重復測定并改變溶液體積。

• 將以下溶液吸取到相應的試管中。

• 混勻各試管，在室溫(18-35℃)下孵育15分鐘。

• 用去離子水調零，測量340nm吸光度。

計算

總空白必須考慮到樣品和葡萄糖測定試劑對吸光度的影響。

 A_{Total Blank} = A_{Sample Blank} + A_{Reagent Blank}

 ΔA = A_Test –A_{Total Blank}

TV = 總檢測體積 (mL)

SV = 樣品體積 (mL)

葡萄糖分子量 = 180.2 g/mole 或等效于 180.2 g/moles

F = 制樣稀釋倍數

ε= NADH 在340nm處的毫摩爾消光系【毫摩爾^-1 cm^-1 或等效于 (mL/μmoles)(1/cm)】

d = 光徑 (cm) = 1 cm

1,000 = 微克到毫克的換算系數

參考文獻：

1、Bondar, R.J.L., and Mead, D.C., Clin、Chem., 20(5), 586-590 (1974).

2、Kunsst, A、et al., Methods of Enzymatic Analysis, 3rd Edition (H.U、Bergmeyer, ed.)、Academic Press (New York, NY), Vol、2, pp、163-172 (1984).

3、Southgate, D.A.T., Determination of Food Carbohydrates、Applied Science Publishers (London, UK: 1976).

4、Cheng, Y.-S、et al., PLoS Genet., 11(10), e1005561 (2015).

5、Chen, J.-R、et al., Endocrinology, 157(11), 4172-4183 (2016).

6、Chen, Q、et al., J、Biotech., 263, 30-35 (2017).