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葡萄糖(GO)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書
2020.02.26   點(diǎn)擊4671次

(本中文說(shuō)明書為翻譯稿,僅供參考,應(yīng)以英文版為準(zhǔn))

貨號(hào):3091314 (Sigma-Aldrich : GAGO20)

儲(chǔ)存溫度:2-8℃

產(chǎn)品描述:

酶作為一種分析工具,在食品、生化和制藥工業(yè)中得到了廣泛的應(yīng)用。酶的方法是特異性的,可重復(fù)的,靈敏的,快速的,因此,是分析目的的理想方法。由于酶的高特異性和敏感性,定量分析可以在很少或沒(méi)有樣品準(zhǔn)備的情況下進(jìn)行1-5

本試劑盒用于食品和其它材料中葡萄糖的定量、酶法測(cè)定。各種出版物已經(jīng)報(bào)道了在不同的系統(tǒng)和樣本上使用該試劑盒,包括果蠅6-8、牛糞9、培養(yǎng)的小鼠肌肉細(xì)胞10、HEPG2細(xì)胞11和水生生物12

原理:

葡萄糖(GO)檢測(cè)試劑盒原理圖

• 葡萄糖氧化酶將葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫。

• 過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的存在下與鄰二苯胺反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。

• 氧化的鄰二苯胺與硫酸反應(yīng)生成更穩(wěn)定的有色產(chǎn)品。

• 在540 nm處測(cè)得的粉紅色的強(qiáng)度與原始葡萄糖濃度成正比。

試劑盒組成:

1、葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化物酶試劑

• 將未打開的試劑盒試劑保存在2-8℃。每個(gè)膠囊包含500單位的葡萄糖氧化酶(黑曲霉),100單位(purpurogallin units)的過(guò)氧化物酶(辣根)和緩沖鹽。

• 將膠囊內(nèi)容物倒入琥珀色的瓶子中。

• 將這些物質(zhì)溶解在39.2 mL去離子水中。

• 該溶液在2-8℃最多穩(wěn)定一個(gè)月,在-20℃冷凍至少六個(gè)月。

• 如果出現(xiàn)渾濁,請(qǐng)丟棄。

2、鄰二苯胺試劑

• 將未打開的試劑盒試劑保存在2-8℃。盡量減少曝光。預(yù)先稱量的小瓶中含有5毫克的鄰二苯胺鹽酸鹽。

• 用1.0 mL的去離子水重新配制鄰二苯胺小瓶的內(nèi)容物。

• 翻轉(zhuǎn)樣品瓶幾次以溶解。

• 避免將試劑暴露在光線下。

• 溶液在2-8℃下穩(wěn)定3個(gè)月。

3、分析試劑

• 向裝有39.2 mL葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化物酶試劑的琥珀瓶中加入0.8 mL鄰二苯胺試劑。

• 將瓶子倒過(guò)來(lái)幾次混合。

• 盡量減少暴露在光線下。

• 溶液在2-8℃下穩(wěn)定1個(gè)月。

• 如果出現(xiàn)渾濁或其他顏色,請(qǐng)丟棄。

4、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液

• D-葡萄糖,在0.1%的苯甲酸中為1.0 mg/mL。

• 該標(biāo)準(zhǔn)可追溯到NIST標(biāo)準(zhǔn),并提供即用型。

• 在2-8℃穩(wěn)定至少六個(gè)月。

• 如果出現(xiàn)混濁,請(qǐng)丟棄。

必需但未提供試劑:

硫酸,ACS試劑,為18M硫酸試劑。在去離子水中準(zhǔn)備6M溶液。

儀器:

1、分光光度計(jì)或比色計(jì):可在540nm下測(cè)定吸光度。

2、比色皿。

3、試管,18 mm×150 mm

4、移液器:能夠準(zhǔn)確分配20 μL至2.0 mL的體積。

5、能保持溫度在37℃的水浴鍋

注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明:

本試劑僅供科研使用,不能用于藥品、家庭以及其他用途。有關(guān)危險(xiǎn)和安全操作規(guī)程的信息,請(qǐng)參閱安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟:

樣品制備:

液體:

• 用去離子水將樣品稀釋至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。

• 如有必要,對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾或去蛋白處理以使其澄清。

• 樣品葡萄糖含量較低且顏色較深時(shí),應(yīng)予以脫色處理。

• 含碳酸或發(fā)酵樣品,須脫氣處理。

固體:

• 稱量0.1mg樣品。

• 用去離子水提取樣品。可以將溶液加熱(<75℃)以幫助萃取。

• 用去離子水稀釋提取液品至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。

• 如有必要,對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾或去蛋白處理以使其澄清。

測(cè)定:

方法1:標(biāo)準(zhǔn)曲線中的葡萄糖濃度

1、吸取以下溶液到相應(yīng)的試管中:

試管水(ml)樣品(ml)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(ml)
空白試劑1.00--
1#   試管0.98-0.02
2#   試管0.96-0.04
3#   試管0.94-0.06
4#   試管0.92-0.08
測(cè)試-1.00-

2、計(jì)時(shí)起點(diǎn),通過(guò)向第一個(gè)試管中加入2.0 mL的測(cè)定試劑開始反應(yīng)并混合。在向每個(gè)后續(xù)試管中添加測(cè)定試劑之間,要間隔30至60秒。

3、讓每個(gè)試管在37℃下反應(yīng)30分鐘。通過(guò)在每個(gè)試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液,以30-60秒的間隔停止反應(yīng)。小心地將各管徹底混合。

4、在540 nm處測(cè)量每個(gè)試管對(duì)空白試劑的吸光度。

方法2:?jiǎn)我粯?biāo)準(zhǔn)品中的葡萄糖濃度

1、吸取以下溶液到相應(yīng)的試管中:

試管水(ml)樣品(ml)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(ml)
空白試劑1.00--
1#   試管0.95-0.05
測(cè)試-1.00-

2、計(jì)時(shí)起點(diǎn),通過(guò)向第一個(gè)試管中加入2.0 mL的測(cè)定試劑開始反應(yīng)并混合。在向每個(gè)后續(xù)試管中添加測(cè)定試劑之間,要間隔30至60秒。

3、讓每個(gè)試管在37℃下反應(yīng)30分鐘。通過(guò)在每個(gè)試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液,以30-60秒的間隔停止反應(yīng)。小心地將各管徹底混合。

4、在540 nm處測(cè)量每個(gè)試管對(duì)空白試劑的吸光度。

結(jié)果:

計(jì)算方法1:

對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)品,繪制540 nm處的吸光度(y軸)與葡萄糖的毫克含量(x軸)標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果標(biāo)準(zhǔn)曲線不是線性的,則結(jié)果將不準(zhǔn)確。重復(fù)測(cè)定。

對(duì)于測(cè)試,從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定葡萄糖毫克數(shù)。

將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中的稀釋倍數(shù)。

計(jì)算方法2:

葡萄糖(GO)檢測(cè)試劑盒測(cè)定結(jié)果計(jì)算公式

將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中制備的稀釋倍數(shù)。

參考文獻(xiàn):

1、Bergmeyer, H.U. and Bernt , E., Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, ed.). Academic Press (New York, NY), 2nd ed., pp. 1205-1212 (1974).

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